在電場(chǎng)中液體對(duì)于一個(gè)固體的固定相相對(duì)移動(dòng)稱為電滲.在有載體的電泳中,影響電泳移動(dòng)的一個(gè)重要因素是電滲。常遇到的情況是γ-球蛋白,由原點(diǎn)向負(fù)極移動(dòng),這就是電滲作用所引起的倒移現(xiàn)象.產(chǎn)生電滲現(xiàn)象的原因是載體中常含有可電離的基團(tuán),如濾紙中含有羥基而帶負(fù)電荷,與濾紙相接觸的水溶液帶正電荷,液體便向負(fù)極移動(dòng)。由于電滲現(xiàn)象往往與電泳同時(shí)存在,所以帶電粒子的移動(dòng)距離也受電滲影響;如電泳方向與電滲相反,則實(shí)際電泳的距離等于電泳距離加上電滲的距離.瓊脂中含有瓊脂果膠,,其中含有較多的硫酸根,所以在瓊脂電泳時(shí)電滲現(xiàn)象很明顯,許多球蛋白均向負(fù)極移動(dòng)。除去了瓊脂果膠后的瓊脂糖用作凝膠電泳時(shí),電滲大為減弱.電滲所造成的移動(dòng)距離可用不帶電的有色染料或有色葡聚糖點(diǎn)在支持物的中心,以觀察電滲的方向和距離。
電泳介質(zhì)的pH值 溶液的pH值決定帶電物質(zhì)的解離程度,也決定物質(zhì)所帶凈電荷的多少.對(duì)蛋白質(zhì),氨基酸等類似兩性電解質(zhì),pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn),粒子所帶電荷越多,泳動(dòng)速度越快,反之越慢。因此,當(dāng)分離某一種混合物時(shí),應(yīng)選擇一種能擴(kuò)大各種蛋白質(zhì)所帶電荷量差別的pH值,以利于各種蛋白質(zhì)的有效分離.為了保證電泳過(guò)程中溶液的pH值恒定,必須采用緩沖溶液。
等電聚焦電泳 是將兩性電解質(zhì)加入盛有pH梯度緩沖液的電泳槽中,當(dāng)其處在低于其本身等電點(diǎn)的環(huán)境中則帶正電荷,向負(fù)極移動(dòng);若其處在高于其本身等電點(diǎn)的環(huán)境中,則帶負(fù)電向正極移動(dòng)。當(dāng)泳動(dòng)到其自身特有的等電點(diǎn)時(shí),其凈電荷為零,泳動(dòng)速度下降到零,具有不同等電點(diǎn)的物質(zhì)后聚焦在各自等電點(diǎn)位置,形成一個(gè)個(gè)清晰的區(qū)帶,分辨率。
在確定的條件下,帶電粒子在單位電場(chǎng)強(qiáng)度作用下,單位時(shí)間內(nèi)移動(dòng)的距離(即遷移率)為常數(shù),是該帶電粒子的物化特征性常數(shù)。不同帶電粒子因所帶電荷不同,或雖所帶電荷相同但荷質(zhì)比不同,在同一電場(chǎng)中電泳,經(jīng)一定時(shí)間后,由于移動(dòng)距離不同而相互分離。分開的距離與外加電場(chǎng)的電壓與電泳時(shí)間成正比。